生物信息学
植物营养学术交流

土壤全磷、速效磷含量,植物组织全磷含量快速测定方法

离心替代过滤,酶标仪替代分光光度计的土壤全磷测试方法                                     

1.用万分之一天平,称取1g左右的风干土,记录下重量。

2.加入8ml浓硫酸,放置过夜后加入10滴高氯酸,300℃,消煮至白色。

3.在50ml消煮管中定容,可以先加水1/3,混匀后再加水至刻度线附近,放置过夜后再加水至刻度线,摇匀。

4.吸取1ml消煮液到1.5ml离心管中,10000rpm,离心1分钟。

5.吸取50ul上清液+750ul H2O+100ul NaOH(4mol/L,16g NaOH定容到100ml)+100ul钼锑抗试剂到1.5ml离心管中  。

6.摇匀后,14000rcf离心一分钟,室温高于15℃情况下,30min后,吸取300ul至酶标板比色

 

备注:5.中吸取的上清液的量可根据显色状况调整,相应地NaOH的量也要做出调整,保证比色体系体积为1ml,氢离子浓度为0.55mol/L左右,每个样品做三个重复,重复间允许误差<0.005%即50mg/kg。

 

磷酸二氢钾工作曲线制做方法                                                                      

1.先将100mg/L(0.4394g KH2PO4(烘干2小时)先加水300ml,再加5ml浓硫酸,再定容到1L)的磷标贮液(磷酸二氢钾溶液)稀释20倍,比如吸取5ml定容到100ml

2.配制

磷浓度(mg/L) 0 0.1 0.2 0.3 0.4 0.5 0.6 0.8 1 1.2 1.4
5mg/L 磷标液用量(ul) 0 20 40 60 80 100 120 160 200 240 280
钼锑抗用量(ul) 100 100 100 100 100 100 100 100 100 100 100
H2O用量(ul) 900 880 860 840 820 800 780 740 700 660 620

3.摇匀后,10000rpm离心一分钟,室温高于15℃情况下,30min后,吸取300ul至酶标板比色

备注:利用散点图绘制曲线,添加趋势线和r值,r^2要大于0.999。利用forecast.line函数计算比色液磷含量

钼锑抗配制方法                                                                      

  1. 浓硫酸153ml加入500ml左右 H2O(用1L的烧杯),用磁力搅拌器搅匀
  2. 1L烧杯中加入10g 钼酸铵,用磁力搅拌器融化
  3. 0.5g酒石酸锑钾加入100ml左右 H2O(用100ml的烧杯),用磁力搅拌器溶化
  4. 步骤3所得溶液倒入1L烧杯,在磁力搅拌器上混合均匀,定容到1L

 

备注:避光储存,使用时每10ml 加入0.15g抗坏血酸

二硝基酚溶液:0.2g 二硝基酚溶于100ml水中

 

离心替代过滤,酶标仪替代分光光度计的土壤有效磷(碳酸氢钠浸提)测定方法         

  1. 42g碳酸氢钠定容到1L,用4mol/L NaOH溶液(4mol/L,16g NaOH定容到100ml)调节pH至8.5,得到浸提剂
  2. 1.00g风干土加入50ml塑料管中,再加入0.1g活性炭粉,再加入20ml碳酸氢钠溶液,20~25℃,180rpm,震荡30min
  3. 吸取1ml浸提液到1.5ml离心管中,10000rpm,离心1分钟
  4. 吸取200ul上清液+700ul H2O+100ul钼锑抗试剂到1.5ml离心管中
  5. 摇匀后,14000rcf,离心一分钟,室温高于15℃情况下,30min后,吸取300ul至酶标板比色

备注:吸取的上清液体积可以根据显色情况调整,保证比色体系1ml,每个样品做三个重复

 

植物组织全磷含量快速测定

1.将烘干后的植物组织样品磨碎,再将样品粉末继续烘干至恒重。

2.称取0.1g左右的样品粉末,记录下重量,放入50ml消煮管,加入5ml浓硫酸,盖上小漏斗,放置过夜,在300℃下,消煮1h,直到消煮液呈棕黑色。

3.取出消煮管放置在金属试管架下,管口不要对着人,用塑料滴管吸取大约1管双氧水,加入消煮管,消煮液若没有澄清则补加双氧水,之后再消煮1个小时,除去双氧水。

4.在50ml消煮管中定容,可以先加水1/3,混匀后再加水至刻度线附近,放置过夜后再加水至刻度线,摇匀。

5.钼锑抗显色方法

钼锑抗显色体系组份
100ul定容后消煮液+710ul H2O+90ul 4mol/L NaOH+100ul 钼锑抗
200ul定容后消煮液+520ul H2O+180ul 4mol/L NaOH+100ul 钼锑抗
400ul定容后消煮液+140ul H2O+360ul 4mol/L NaOH+100ul 钼锑抗

6.摇匀后,14000rcf离心一分钟,室温高于15℃情况下,30min后,吸取300ul至酶标板比色

 

备注:5.中吸取的上清液的量可根据显色状况调整,相应地NaOH的量也要做出调整,保证比色体系体积为1ml,氢离子浓度为0.55mol/L左右,每个样品做三个重复,重复间允许误差<0.005%即50mg/kg

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